为了*大限度地从纤维素中释放葡萄糖，以便进行后续发酵或化学转化，木质纤维素生物质的预处理是先决条件。一种主要的预处理方法是在高温（140 至 200 °C）下使用稀酸（例如 0.3 – 2% 的硫酸），并根据不同的保温时间和生物质/酸负载量进行处理1。该工艺的缺点是木质素（一种多酚大分子）会部分降解为较小的酚类物质，这些酚类物质会与糖类一起释放到所谓的水解产物中。这些酚类化合物对微生物具有毒性，并且是潜在的发酵抑制剂2-5。
在优化预处理或解 毒方法以*大程度降低抑制剂水平或培育更具抵抗力的微生物时，分析这种酚类化合物的谱图至关重要。在广泛使用的样品制备和净化步骤中，酚类化合物会使用有机溶剂（例如乙酸乙酯）进行液-液萃取，然后通过气相色谱/质谱联用 (GC/MS) 进行分析。
液液萃取虽然有效，但耗时较长，需要4次独立萃取和多次离心步骤。为了减少时间和样品处理步骤，我们采用了 Novum SLE 简化液体萃取 (SLE) 技术，节省了大量时间，并减少了所需的移液和样品瓶处理步骤。
材料和方法
采用两种不同的方法制备木质纤维素生物质：传统液-液萃取法和简化液相萃取法 (SLE)，使用 Novum SLE MAX 96 孔板（部件号 8E-S138-5GA）。在每种萃取方法之前，样品均按以下方式进行预处理：
预处理：
将来自巨型芒草（Miscanthus X giganteus）的稀酸预处理水解液（1.5% 硫酸，190 °C 加热 1 分钟，25% 生物质负载量）用 0.45 µm 聚醚砜 (PES) 滤膜过滤，并加入 20 µg/mL 异丙基苯酚作为内标 (IS)。然后采用液-液萃取或单层萃取 (SLE) 法（见下文）对预处理后的样品进行萃取。
液-液萃取步骤：
取预处理步骤中加标的水解产物1 mL，用0.5 mL乙酸乙酯萃取4次。每次萃取后，进行离心（1500 g，1分钟）以进行相分离。合并各样品的萃取液，用硫酸钠6干燥（样品A）。
简化液相萃取 (SLE) 程序：
将预处理步骤中加标的水解产物 400 µL 上样至 Novum SLE MAX 96 孔板的孔中。样品在吸附剂中浸泡 5 分钟，然后用乙酸乙酯洗脱目标分析物。采用三种不同体积来确定*有效的洗脱体积。使用短脉冲真空，分别加入 1x 0.4 mL（样品 B）、1x 0.8 mL（样品 C）或 2x 0.4 mL（样品 D）乙酸乙酯。洗脱后无需进一步干燥乙酸乙酯。GC/MS 条件：在进行GC 分析之前，将 100 µL 提取物（样品 A - D）与 50 µL BSTFA 在 70 °C 下孵育 30 分钟，然后进行 GC/MS6 分析。所有萃取均重复进行三次，并按以下顺序进行重复（1-3）：样品 A1 – D1，然后 A2 – D2，然后 A3 – D3，以避免由于运行时间较长（67 分钟）导致未处理样品的成分发生变化而产生任何偏差。以不分流模式将 1 µL 注入 5 ms 毛细管气相色谱柱（30 mx 0.25 mm x 0.25 µm）。
使用7890A 气相色谱仪与 5975C 单四极杆质谱仪联用进行分析，分析参数如下：进样口和传输线温度 280 °C，载气：氦气，流速 1 mL/min，升温程序：75 °C 恒温 3 分钟，以 5 °C/min 升至 150 °C，以 0.5 °C/min 升至 160 °C，以 2 °C/min 升至 190 °C，以 5 °C/min 升至 240 °C，以 70 °C/min 升至 325 °C，恒温 3 分钟。采用全扫描模式检测 m/z 35-500 离子。
结果与讨论
图 1 显示了使用 3 种洗脱程序（0.4 mL、0.8 mL 和 2x 0.4 mL）从 Novum SLE MAX 96 孔板洗脱的水解产物中 25 种选定的酚类化合物的相对回收率，与通过传统液-液萃取获得的值（代表图上为 100%）相比。
总体而言，Novum SLE 萃取法的回收率与传统液-液萃取法相当，且所需时间仅为后者的一小部分（样品制备时间减少了五倍）。0.4 mL 乙酸乙酯洗脱的分析物回收率普遍低于 0.8 mL 和 2x 0.4 mL 体积萃取法。例外情况是 4-羟基-3-甲氧基肉桂醛（图 1，分析物 9），所有洗脱体积的回收率几乎相同（分别为 95% 和 93%），而芥子醛（图 1，分析物 12）在 0.4 mL 萃取体积下的回收率 (93%) 高于其他萃取体积（分别为 89% 和 85%）。然而，0.4 mL 萃取体积通常被认为不是*佳选择。将洗脱体积增加到 0.8 mL 可提高回收率，大多数回收率达到 90% 以上。 4-羟基苯甲醛 (87%)（图 1，分析物 1）和香兰素 (89%)（图 1，分析物 2）的产量略低。只有同系物 2-愈创木酰乙醛（图 1，分析物 14）和 2-丁香乙醛（图 1，分析物 16）的回收率较低，分别为 75-76% 和 73-75%。将 0.8 mL 洗脱液分两步（2x 0.4 mL）加入，与单次 0.8 mL 洗脱相比，回收率并未提高。TN-0082 第 2 页，共 4 页 应用
