HPLC 流动相中常用的溶剂

高压液相色谱法 （HPLC） 是制药和其他化学工业中*常用的技术之一，用于分离、定性和定量混合物的成分。混合物在高压下通过溶剂（称为流动相）通过色谱柱中的固定相。

在选择用于 HPLC 的流动相时，选择的溶剂将取决于分析物与固定相之间所需的相互作用类型。虽然有许多不同的色谱模式，但本文将重点介绍正相和反相色谱。流动相通常由两种不同的组分组成：一种是促进分析物在固定相上保留的弱组分，另一种是促进分析物从色谱柱中洗脱的强组分。

用于正相色谱的流动相

正相 HPLC 的流动相弱部分必须是非极性（亲脂性）溶剂。这是因为正相 HPLC 中的分离依赖于分析物对极性固定相的吸引力。非极性不会吸引分析物的分子，从而增加分析物在固定相中的保留时间。当需要从色谱柱中洗脱分析物时，然后使用极性有机溶剂作为流动相的强部分。

*常用的正相流动相溶剂是：

• 己烷
• 庚烷
• 氯仿
• 苯
• 乙酸乙酯二氯甲烷
• 乙醇
• 异丙醇

用于反相色谱的流动相

对于反相 HPLC（*常用的 HPLC 模式）使用的流动相，弱溶剂本质上必须是极性的，这样它才能在分析物通过色谱柱时帮助排斥或推动分析物向非极性疏水性固定相。同样，结果是分析物的保留时间增加。

反相 HPLC *常用的流动相是水。将水与有机改性剂以 0% 至 100% 的比例混合。改性剂可以是乙腈、甲醇或其他极性有机溶剂。增加有机改性剂或强溶剂将有助于从色谱柱中洗脱分析物。

溶剂在流动相中的混合

由于在 HPLC 流动相中很少使用单一溶剂，因此在混合溶剂时必须考虑以下因素：

• 混溶性 – 混合在一起的溶剂应该能够相互混溶，这意味着一种溶剂需要能够与另一种溶剂溶解。将不混溶的溶剂一起使用可能会对色谱柱造成永 久性损坏。
• 温度 – 溶剂在混合之前应保持相同的温度。让他们在实验室里坐一会儿就可以确保这一点。
• 纯度 – 溶剂必须为 HPLC 级或更高等级，以确保分析具有低背景，并*大限度地减少对系统的长期损害。这包括使用的水，这些水应该经过反渗透。
• UV cut-off wavelength （紫外线截止波长） – 可以检测溶剂的*低波长。选择溶剂时，必须使其 UV 截止波长低于分析中的分析物。
• 折光率 – 溶剂混合时，其折光率应与样品的折光率明显不同。
• 粘度 – 溶剂应具有低粘度，以确保其能够轻松流过固定相以实现有效的传质。粘度较高的溶剂会导致系统中的背压升高，这可能会损坏组件并损坏色谱柱。
• 可压缩性 – 溶剂的可压缩性会影响流动相的流速。泵送系统保持流速一致，但所用溶剂的流速应尽可能保持一致。