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[色谱柱的使用]大赛璐手性柱使用说明（二）

大家好

本期给大家介绍的是

大赛璐多糖涂敷反相分析用手性柱

在HPLC系统的使用说明及注意事项

多糖涂敷型反相手性柱与上一期介绍的

多糖涂敷型正相手性柱

虽然具有相同的手性填料

但是后期工艺不同

所适用的流动相体系也有所不同

多糖涂敷型正相柱不耐受水

多糖涂敷型反相柱可以耐水

即适用于“水-有机溶剂”的反相流动相体系

在大赛璐手性柱柱盒内有

出厂的英文原版说明书和中文补充说明书

请使用前务必仔细阅读

若说明书不慎遗失可在大赛璐官网进行下载

（详见文末）

现在就正式开始带着大家一起

了解手性柱使用流程


适用型号

CHIRALPAK®

AD-RH/AD-3R

CHIRALCEL®

OD-R/OD-RH/OD-3R

CHIRALPAK®

AS-RH/AS-3R

CHIRALCEL®

OJ-RH/OJ-3R

CHIRALPAK®

AY-RH/AY-3R

CHIRALCEL®

OZ-RH/OZ-3R

CHIRALPAK®

AZ-RH/AZ-3R

CHIRALCEL®

OX-RH/OX-3R



注意

事项

1

强碱性的添加剂或样品溶液不能进涂敷型反相手性色谱柱，以免破坏色谱柱硅胶。

2

涂敷型反相手性柱适合分离水溶性样品、含水制剂，或者要求使用反相条件(如需用到MS检测)的样品等。要避免使用极端pH值，以防损伤固定相的硅胶基质。

3

涂敷型反相手性柱在使用缓冲液后，务必冲洗干净后再保存。


手性柱使用前


1

明确手性柱当前的使用溶剂


图｜柱盒内英文原版说明书【Column description】

新柱

新柱查阅柱盒内英文原版说明书【Column description】

旧柱

与上一次手性柱使用人确认

❖

新的色谱柱初次使用，需确认色谱柱的运送保存溶剂(详见 Shipping solvent)，如流动相与保存溶剂互溶，可直接使用，一般不需要对柱子进行“活化”。


2

明确仪器当前使用的溶剂



图｜柱盒内英文原版说明书【CAUTION】


将色谱柱接到色谱仪之前，请根据液相系统中的流动相，必须先用合适的溶剂冲洗流路（包括流通阀和定量环）。


  • 液相系统之前使用的是含盐的水相流动相
    先用蒸馏水或去离子水冲洗系统，置换之前的含盐流动相；再用流动相冲洗系统，置换水。
  • 液相系统之前使用的是正相流动相
    先用异丙醇或乙醇冲洗系统，置换之前的流动相；
    再用蒸馏水或去离子水冲洗系统，置换乙醇；
    *后用流动相冲洗系统，置换水。
*建议冲洗体积至少是60mL

3

明确手性柱将要使用的溶剂

图｜柱盒内英文原版说明书【CAUTION】

① 禁用溶剂：丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃等

禁用溶剂即使存在微量，也会破坏手性固定相。

❖

如果使用的是自动进样器，进样间隔的冲洗液也必须更换成合适的溶剂。

② 色谱柱运行流动相之前的操作
使用含盐溶液或缓冲液的流动相时，请勿直接让目标流动相通过柱子，须按以下操作进行：
1) 液相系统先置换成(不含盐溶液或缓冲液)水(HPLC级)和有机相混合溶液(比例同流动相)，充分置换后，将流速调至0.5ml/min；
2) 连接色谱柱进口，待看到色谱柱出口有液体流出时，将出口与检测器连通；
3) 冲洗10-20分钟后，再换成目标流动相。

手性柱使用中


操作条件

请参阅柱盒内英文原版说明书

【Operating conditions】



流动相方向

色谱柱标签上的指示

压力限制*

10μm：建议3Mpa下使用

*高耐压10Mpa

5μm：建议6Mpa下使用

*高耐压30Mpa

3μm：建议15Mpa下使用

*高耐压30Mpa

柱温

0 ~40°C

※ pH>7.0时请在5-25℃内使用

pH范围

pH 2.0~9.0

禁止使用pH大于9的强碱性流动相

否则会损伤硅胶填料


*说明1：压力是指由手性色谱柱本身引起的压力。其值为总压(液相体系+色谱柱)与液相体系(不接色谱柱时)压力之差。

*说明2：以上建议压力来源于大赛璐上海实验室使用经验



分析条件

请参阅柱盒内英文原版说明书

【Operating procedure】

如需了解手性柱方法开发策略

可咨询Daicel授权代理商-

广州绿百草

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图｜英文原版说明书【Operating conditions】

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手性柱使用后


请参阅柱盒内英文原版说明书

【Column care/Maintenance】



图｜英文原版说明书【Column care/Maintenance】

手性柱的冲洗

实验结束后，如担心色谱柱上吸附了一些未洗脱的化合物污染，先用不含任何盐或缓冲盐的流动相冲洗，再用100%乙腈以0.3ml/min的流速冲洗2个小时。如果未洗脱的化合物更易溶解于甲醇中，则将上述冲洗溶剂换成甲醇。


*以上流速推荐，主要是针对4.6mm内径柱，其他规格柱，请按照说明书推荐的流速进行冲洗或咨询大赛璐色谱柱技术支持。


为避免高柱压对柱子填料的冲击，冲洗时需控制流速。一般地：

对于5μm粒径柱，冲洗时柱压推荐不超过5MPa；

对于3μm粒径柱，冲洗时柱压推荐不超过15MPa。

将色谱柱切换至100%乙腈或甲醇前，必须把液相系统和色谱柱中的盐置换完全，以免发生盐析。


当色谱柱出现柱效下降、柱压升高等异常情况，但常规冲洗方法没有改善时，可以参照柱盒内中文补充说明中的特殊方法进行冲洗。
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手性柱的保存

色谱柱从液相仪器上取下前，需用不含任何盐或缓冲溶液的流动相(例如水/乙腈 60:40 (v/v))将盐彻底置换。


若一周以上不使用色谱柱，请将柱子保存再不含任何盐的中性溶剂中(在耐受范围内的溶剂)，例如：使用水/乙腈 60:40(v/v)来保存色谱柱。


 技术支持


若在使用过程中，出现手性柱分离异常或柱压过高等异常现象发生时，请及时与大赛璐的授权代理商广州绿百草联系。

Tel：400-883-9117


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