我什么时候应该使用渐变？

在反相 HPLC 中，如果成功分离的条件未知，建议运行搜索梯度。 这种运行是在 30-50 分钟内从 10% 到 80% 的有机改性剂进行的，使用洗脱强度的线性增加。 根据此筛选梯度的结果，可以选择合适的流动相组成进行等度洗脱，或者必须遵循合适的梯度。

可以选择梯度洗脱来分离极性差异很大的化合物。 根据经验，如果在超过 25% 的筛选梯度期间可以检测到峰，则梯度洗脱可能是该分离的zui佳选择。 如果峰出现的时间小于搜索梯度的 25%，则应首 选等度洗脱，因为在等度条件下选择性始终较高。

如果样品由两组不同的化合物组成，分步洗脱可以获得良好的分离结果。 在这种情况下，首先采用等度流动相洗脱，这样可以为较少保留的一组化合物提供令人满意的分离结果，然后在一个步骤中将流动相的洗脱强度增加到这样一个程度，即可以将保留较多的一组化合物分离出来。一种适当的方式。 阶梯梯度也可用于在每次进样后清洗色谱柱。 在这种情况下，洗脱强度在zui后一个峰洗脱后急剧增加。 然后可以从色谱柱中去除强保留的杂质。