HPLC 色谱柱使用说明

HPLC用色谱柱。每一根色谱柱在出厂前，都经过严格的质量检测，产品保持同一品质，用户可以安心使用。

一、使用前的检查和须知事项

•  检查包装箱的外观是否完整、有无碰撞损坏痕迹;

•  打开包装,检查色谱柱的填料名称、规格尺寸、连接型式是否相符;

•  每根色谱柱均附有相应出厂检验报告，报告.上记载了序列号、产品编号、填料批号、柱性能、测试色谱条件等内容，阅读后请妥善保管。

二、色谱柱在使用过程中的注意事项

无特殊说明情况下，本公司色谱柱通常保存于下表流动相中。用户使用前，一定要注意色谱柱评价流动相与分析样品实际使用流动相互溶。

2条件，一定要用某中介流动相(如异丙醇)珞换掉柱内的流动相，然后再使用反相流动相; C18固定相采用甲醇/水或乙腈/水为评价流动相，若要使用含盐浓度较高的流动相，使用前请用有机溶剂含量较低的溶剂(如5-15%的甲醇或乙腈水溶液)替换原来的评价流动相。色谱柱内溶剂不互溶或盐沉淀等现象会对柱性能造成极大伤害，明显地减少柱寿命。第1次使用，建议先用保存流动相低流速(0.2ml/min) 冲洗1-2个柱体积，再换用测试流动相，这样可以保护柱床，延长柱寿命。

• 色谱柱的安装

色谱柱在运输过程中或在没有使用时，它的两端总是用堵头进行密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时，首先移去两端的堵头。请注意将流动相流动的方向与柱上标记的方向保持一致。除非出于特殊考虑，例如为了清理堵在色谱柱入口端的脏污等而需要将色谱柱反接以进行冲洗时，建议用户在接上色谱柱时一定要遵循柱上标记的方向，双向混用容易导致两端填料同时污染，不利于再生和维护。

• 样品与流动相

样品中杂质是造成色谱柱污染、柱效下降的主要原因之一，复杂样品可选用样品过滤器或样品预处理柱(SPE柱)对样品进行预处理，一定要保证样品不含有微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。有时样品溶剂与流动相不匹配(不互溶、极性差异等)会导致色谱峰形变差、出现鬼峰等现象，建议尽可能采用流动相溶解样品。

流动相所用的各种溶剂至少应是分析纯，尽可能使用色谱纯试剂，流动相用水zui好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。使用前zui好使用溶剂过滤器过滤除去可能存在的微粒。流动相应该现用现配，对于含盐的溶液尤其应该注意长时间放路会产生**或出现沉淀。保证储存流动相的溶剂瓶清洁。

三、色谱柱的保养

• PH
常规硅胶基质键合相填料高效液相色谱柱pH值适用范围是2.0~7.0，当必须在pH值使用范围边界条件使用高效液相色谱柱时，一定要注意每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂彻底清洗路换流动相。

•  压力

尽管5000 psi的压力下使用，但正常的操作压力应当低于3000 psi。长时间在高压下运行会损坏色谱柱和输液泵。由于压力来源于流速，因此zui大流速将受制于系统所能承受的压力。一般而言，柱压会随着色谱柱使用时间的增加而逐渐增加。压力突然增加预示色谱柱入口端的筛板发生了堵塞。在这种情况下，建议将色谱柱反接后用适宜的溶剂进行冲洗。

•  温度

zui高操作温度为60C。长时间在高温(>75'C) 下操作也会损坏色谱柱，这种情形在高的pH (>8) 条件下特别突出。

•  储存

1)短时间或过夜储存:使用缓冲溶液或含盐流动相时，需要用适当的溶剂将色谱柱和系统内流动相珞换，反相色谱柱储存溶剂中有机溶剂浓度zui好不要低于20%。

2)长时间储存:存储之前色谱柱一定要仔细清洗,避免残留样品杂质。反相柱可以用纯甲醇或乙腈，正相柱可以用纯正已烷。为了防止柱床干涸，请用堵头塞紧色谱柱的两端。存储温度zui好是室温状态。

四、色谱柱的再生

高效液相色谱柱是消耗品，会随使用时间或进样次数的增加，出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰，一般来说可能是柱效下降。需要定期进行彻底清洗和再生处理。

•  反相色谱柱

取下色谱柱，重新连接到色谱仪上，让流动相反方向流过色谱柱，流速为通常使用正常流速的一半。依次使用5~10%的甲醇或乙腈、甲醇或乙腈、异丙醇、二氯甲烷、正已烷、二氣甲烷、异丙醇、甲醇或乙腈冲洗色谱柱，每种流动相流经色谱柱不少于20个柱体积，再按正确的流动方向，把色谱柱重新连接到色谱上，重新平衡后检查性能是否恢复。注意:由于异丙醇的粘度大，建议注意根据柱压力变化作调整，如将流速降到0.1-0.3ml-min。

•  正相色谱柱

取下色谱柱，重新连接到色谱仪上，让流动相反方向流过色谱柱，流速为通常使用正常流速的一半。依次使用50:50 (v/v)甲醇:氯仿溶液、乙酸乙酯冲洗色谱柱，再按正确流动方向，把色谱柱重新连接到色谱上，用流动相平衡后检查性能是否恢复。