中药配方标准中“水蛭（蚂蟥）配方颗粒的检测”，使用迪马色谱柱

【来源】本品为水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman的干燥全体经炮制并按标准汤剂的主要质量指标加工制成的配方颗粒。

【制法】取水蛭（蚂蟥）饮片4000g，加水煎煮，滤过，滤液浓缩成清膏（干浸膏出膏率为12.0%~20.0%），加入辅料适量，干燥（或干燥，粉碎），再加入辅料适量，混匀，制粒，制成1000g，即得。

【性状】本品为浅灰绿至棕绿色的颗粒；气微，味酸。

【特征图谱】照高效液相色谱法（中国药典2020年版四部通则0512）测定。

色谱条件与系统适用性试验    以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5µm）；以乙腈-0.2%磷酸（0.5:99.5）为流动相；柱温25℃；流速为每分钟0.8mL；检测波长为270nm。理论板数按次黄嘌呤峰计算应不低于5000。

参照物溶液的制备    取水蛭（蚂蟥）对照药材1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水20mL，加热回流60分钟，取出，放冷，离心处理（转速10000r/min，时间10分钟），取出，取上清液滤过，作为对照药材参照物溶液。另取次黄嘌呤、尿嘧啶对照品适量，加10%甲醇制成每1mL各含0.2mg的混合对照品溶液，作为对照品参照物溶液。

供试品溶液的制备    取本品，研细，取约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水10mL，超声处理（功率200W，频率53kHz）10分钟，取出，放冷，离心处理（转速10000r/min，时间10分钟），取出，取上清液滤过，即得。

测定法    分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10µL，注入液相色谱仪，测定。

供试品色谱中应呈现5个特征峰，并应与对照药材参照物色谱中的5个特征峰的保留时间相对应，其中峰2、峰3分别应与尿嘧啶、次黄嘌呤参照物峰的保留时间相对应，与次黄嘌呤参照物相应的峰为S峰，计算峰1、峰4、峰5与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10%范围之内。规定值为：0.51（峰1）、1.41（峰4）、1.82（峰5）。