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核苷酸、核苷及核酸碱基分析Premier新方案

RNA组分分析作为许多不同工作流程的重要环节，包括但不限于⻝品检测和代谢组学研究。

这类分析的挑战之⼀是它们的极性较强，而且结构相似。

可以使用反相LC，但通常需要离⼦对试剂增加保留，而使用离子对试剂时需要很长时间才能在系统中达到平衡，使分析工作更加复杂。

今天小编就给大家介绍一个分离核酸碱基、核苷、核苷酸及磷酸核糖等13种RNA组分的HILIC方法。

图1. 核酸碱基、核苷和核苷酸的分析物结构。



色谱条件


LC系统：配备四元溶剂管理器的ACQUITY Premier系统

MS系统：Xevo TQD

色谱柱：规格均为2.1x50 mm

  • ACQUITY UPLC BEH Amide（货号：186004800）

  • Atlantis Premier BEH Z-HILIC（货号：186009978）

  • 其它品牌A：HILIC-Z  

  • 其它品牌B：Polar X

样品瓶 ：LCMS TruView zui大回收样品瓶（货号：186005668CV）

流动相A：水

流动相B：乙腈

流动相C：200 mM甲酸铵(pH 3.0)

梯度表：

柱温：50 °C



测试结果

图2. 13种RNA组分在四种不同的HILIC固定相上的分离结果（1.尿嘧啶；2.腺嘌呤；3.腺苷；4.尿苷；5.胞嘧啶；6.⻦嘌呤；7.胞苷；8.⻦苷；9.单磷酸腺苷；10.单磷酸尿苷；11.磷酸核糖；12.单磷酸胞苷；13.单磷酸⻦苷）。

本次实验中使用的四支色谱柱，除BEH Amide外，其余均为两性离子或混合模式的色谱柱，由上图可见，它们在RNA分析物保留和选择性方面存在差异。

只有Atlantis Premier BEH Z-HILIC色谱柱能使所有化合物实现分离，而在其他色谱柱上至少均出现⼀组共洗脱化合物。

虽然Xevo TQD也可以检出这些化合物的峰，但更好的分离度便于对这些物质进行更好地积分和表征。

Atlantis Premier BEH Z-HILIC色谱柱采用的MaxPeak高性能表面(HPS)硬件可减轻磷酸化合物与色谱柱金属表面间的次级相互作用。

在某些条件下，这些金属和分析物的相互作用会导致峰形差异，甚⾄可能导致样品损失。


注：本文分享自【沃特世技术服务】公众号。

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