HILIC 中的柱温对分离的影响

这种一般行为的主要例外是在硅胶柱上分离碱性分析物或在氨基柱上分离酸性分析物的情况。 在带电分析物和带电固定相之间存在强静电吸引力时，提高柱温会导致保留时间增加。 对这种现象的解释是基于以下考虑：在水溶液中两个带相反电荷的基团之间形成离子对是一个吸热过程，在较高温度下得到支持（图 2）。

混合物中不同类型的化合物可能对保留机制、更多的分配或更多的静电相互作用有不同的贡献。 因此，柱温也会影响它们的选择性，导致洗脱顺序的变化。

柱温的升高可以提高更多配置之间的分析物转化率。 例如，碳水化合物和类似化合物以几种互变异构形式的混合物存在于水溶液中，导致出现宽峰或分离峰。 柱温升高具有将不同形式合并为单个窄峰的效果。

在 HILIC 中，柱温通常设置在 10 到 60°C 之间。 根据固定相稳定性和分析物稳定性，可以使用更高的温度值。

值得指出的是，与流动相的组成相比，温度的变化对保留的影响较小。
在 HILIC 方法的开发过程中，应按以下顺序优化色谱参数：
(1) 流动相中的有机物含量
(2) 流动相的盐浓度和 pH 值
(3) 柱温