当样品的进样量在**范围内时,改变进样量会相应地影响峰高和峰面积。但保留时间、峰宽和分辨率的影响很小。当注射量或质量过大时,会引起过载现象。随着峰宽的增加,峰形变差和分辨率降低是不可避免的
对于长度为50-250mm,内径为4-5mm的色谱柱,单次进样的进样质量应小于50μg,进样体积应小于25μL。过载分为体积过载和质量过载两种,下面将介绍两种过载对分离的影响。
(1) 体积过载:下图显示了分别含有10、40、60、80和100μL的1mg/mL连翘苷的色谱图。可以看出,10μL的峰型*好,40μL的峰面积*大,随着进样量的增加,峰型越明显。
(2) 质量过载:下图是氨基酸及其衍生物的测定,显示了正常和超大质量条件下的峰形状。
过载会影响色谱峰的形状,只有当样品的体积和质量在合适的范围内时,才能得到良好的峰形状。现在,我们将继续讨论哪些因素会导致领 先区域或落后区域。
领 先区域:(拖尾系数<0.95)
1.溶剂效应的影响
(1) 用流动相溶解样品:(姜黄素标准品)
(2) 首先用强溶剂溶解样品,然后用流动相稀释:(石杉碱标准)
2.缓冲作用不当:(注射苦参碱)
3.仪表系统不正确
在传统液相色谱仪上使用Ultisil®XB-C18柱(4.6×50mm,1.8μm)时,其峰形将受到系统大死体积的影响。
拖尾面积:(拖尾因子<0.95)
1.降低pH值并抑制二氧化硅羟基的电离。
2.增加缓冲盐,提高缓冲效果
3.由于每种缓冲盐的缓冲容量不同,可以通过改变缓冲盐来调整
4.屏蔽二氧化硅的影响(如添加三乙胺)
在我们的定性和定量检测分析中,峰的形状对我们的实验结果有很大的影响,因此确保良好的峰形状是我们实验成功的关键,而异常峰形状的检测和解决当然是我们实验分析的一项重要技能。
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