收藏级干货 || 如何解决背压增加&堵塞或污染问题？

HPLC压力升高怎么办？

注：柱内径单位：㎜，柱长度单位：㎜，粒径单位：μm，*佳流速：mL/min，乙腈的预估压力：（psi）@30°C，甲醇的预估压力：（psi）@30°C

如何确认压力源？

如果您一根色谱柱使用了一段时间，与新色谱柱压力相比，发现压力增加，您需要查看此压力来自何处，也许是来自色谱柱，也许不是。收藏级干货 || 如何解决背压增加&堵塞或污染问题？

那么可以通过以下步骤确定（敲黑板，划重点！）：

A. 将柱出口连接断开，将出口管直接放入废物瓶或烧杯中。

打开泵，然后观察并记录压力。

还要注意从色谱柱中流出的任何微粒或有色物质。

连续泵20分钟或直到色谱柱不再流出可见物质。

再次观察压力，看看它是否已更改，然后记录数值。 

如果在20分钟后仍有可见物质流出色谱柱，请拆下并更换柱子。

B. 如果在步骤A中断开色谱柱后，压力立即恢复到该色谱柱的正常范围（上述步骤4记录的），且没有可见残留物流出，则表明色谱柱后的流路中有堵塞，可能是在通向检测器的管道或阀门的某处，也可能是在检测器流动池中。

按照仪器制造商的建议，根据需要更换管道和/或清洁流动池。

检查所有配件和阀门的装配是否正确，并确保管道没有压扁。

检查缓冲盐是否有积聚，并根据需要清洁或更换部件。

C. 如果在进行步骤a之后，没有观察到残留物，压力没有显着降低，取下色谱柱并换成两通连接器。

泵稳定后，将压力与上述的步骤3中记录为基线的压力进行比较。

如果系统压力接近之前的步骤3中的数值，那么您已经确认了压力的增加来自于色谱柱，*可能是颗粒堵塞了柱入口筛板。

对于3μm和5μm粒径的全多孔粒子柱，尝试使用流动相反冲色谱柱30分钟，出口连入废物瓶。 （请注意，对于1.9μm UHPLC色谱柱或Raptor色谱柱，不建议反冲）。

如果压力仍然高，请使用一系列具有不同极性的溶剂重复反冲。

如果您使用的流动相含有缓冲溶剂，用含有大量水（对典型的C18相，用60-90％），不含缓冲盐、酸或改性剂的溶液。请小心使用氯化溶剂，因为PEEK材料可能略有膨胀。

如果反冲不能降低背压，那么*可能是颗粒或活性化合物与柱子发生了不可逆地结合，则需要更换。

同样，如果按这些步骤并正向冲洗1.9μm UHPLC色谱柱或Raptor色谱柱，没有解决问题，那么您的色谱柱可能寿命到了，需要更换。

D. 如果在不接色谱柱的情况下检查系统压力，压力高于之前不接色谱柱的压力（参见上述步骤3），则系统中存在堵塞。 请查阅您的HPLC操作手册或联系HPLC仪器厂家。

为了避免将来发生这样的问题，我们强烈建议您使用保护柱，以保护您的液相色谱柱，避免筛板堵塞和色谱柱污染。

那么，请看下图：