转:跑好薄层板的方法这样的资料不少,中国药典附录就说的很详细!不过要真的跑好薄层板还真不是容易的,当然我说的是各个都跑的好的话。1、薄层板,这个我用过预制板也自己铺过。薄层板如果是商品板一般比较好,都比较薄,平整,就是载样量太小,如果碰上点样量大的,还是自己铺的好,薄层板比较厚,载样量大,如果有点10-20ul的,就看出不同来了。 但是自己铺的板也有缺点就是如果铺的厚了,不如商品板灵敏,如果遇到浅颜色的点特别是浅黄-黄颜色上紫外灯的点,我碰到一次商品板阳性而自己铺的阴性了,就是自己铺的太厚的缘故。另外现在因为商品板质量比较好例如墨克的,国内的青岛海洋的,我们都用商品板了。如果要薄层扫描,还是买好的板使用。如果用到NaOH板之类的,用溶剂浸泡一下晾干就行。另外活化什么的看一下药典附录比较权威的哈。2、点样 一般药品标准中都有点样了的规定有的是限度有的是固定的体积。用毛细管现在很少用的都用,微量进样器。当然做含量也有自动点样仪器。我们常用手动点样,点样的点按照药典的要求直径大小*好了,我看很多化验人员都是想点的越小越好,我看未必,如果都点于一点,往往点样量一大,薄层板就载不了了,导致点不成圆形,也影响展开。我看要根据情况定,点的多少和斑点大小成正比。当然也有点成条状的,另说了。我一般点的直径也就1mm上下。另外现在的标准有些做的很不好或者各个企业的产品生产工艺不一样吧,特别是中成药往往按照标准操作,提取出来的供试品,用规定的体积1ml2m等一溶解,黏糊糊的,根本没有办法点样,薄层板根本不吸附,这样我常常按照标准稀释一倍或2倍,点样量也随之倍数增加。这样供试品溶液稀释后,有利用点样。另外要说的,就是点样量不是越大越容易出清晰的点,有些点样量大往往出现拖尾,背景模糊,反而看不清了。我的经验是往往根据标准 上 下点三个点,放在一起,一起参照看,比较容易判断准确!当然薄层扫描的要严格按照规定,这个方法一般还行,就是供试品精制除杂做好了,一般展开背景就清晰容易分离。3、展开剂:这个是*重要的,我常常看到因为展开剂配制不好的,而呈阴性的。展开剂配制要认真,混匀。如果低温冷藏的要按照规定冷藏。4、展开方式:我用过立式展开和卧式展开,*好的就是立式展开,展开时溶剂前沿一般平。我常用双槽立式磨砂玻璃的展开缸。展开剂放入后,先饱和后放入点样好的薄层板,注意不好让展开剂泡了点样点,或距离太近。一般距离点样点有个2-3mm的距离就比较好。放入薄层板时一定要与展开剂液面平行放入,薄层板两侧也不要碰两侧的展开缸,要不然要出现边缘效应!5、喷板:我有时做浸板,因为这样不呛人。但*好还是喷板,现在都使用自动喷雾器,喷雾效果好。喷雾一定要均匀,量要足,特别是对做含量扫描的,尤其是。如使用玻璃喷瓶,*好买个皮老虎,喷瓶距离薄层板要远,只有那样喷雾雾滴小效果好。6、显色。喷雾完成后,一般要显色,如果显色装置当然*好,如果是烘箱一定要把玻璃板;立起来或两侧垫起来,如直接房子铁板上,玻璃板与之直接接触恐怕显色不均匀,尤其要上扫描含量测定的。另外显色一定要完全,一般以显色斑点清晰鲜艳。特别是硫酸乙醇显色的,如果显色不完全,有些点不出来或不完全,影响含量大小。如果烘过了,背景黑了,显色斑点也变色,如果上薄层扫描就峰面积小,影响含量了。
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