[肝素回收率≥95%]助力新国家标准的食品中乳铁蛋白测定

一、试剂配制

磷酸盐缓冲液Ⅰ：

称取7.1 g磷酸氢二钠、58.4 g氯化钠，加900 mL水溶解，用磷酸调pH至8.0±0.2，加水定容至1000 mL，临用现配。

磷酸盐缓冲液Ⅱ：

称取28.4 g磷酸氢二钠，加900 mL水溶解，用磷酸调节pH至7.5±0.2，加水定容至1000 mL，临用现配。

0.1%三氟乙酸溶液：

量取1 mL三氟乙酸注入900 mL水中，用水稀释至1000 mL，过0.45 μm滤膜。

二、样品处理

牛乳铁蛋白标准储备溶液(5.0mg/mL)：

称取50mg(精 确至0.1mg)牛乳铁蛋白标准品用水溶解,转移至10mL容量瓶并定容至刻度,混匀,0℃~4℃条件下保存,可保存3个月。

三、操作程序

活化：

取出Lubex肝素免 疫亲和柱， 肝素亲和柱先用5mL磷酸缓冲液Ⅱ活化，准确移取10ml上清液过柱；

用10ml磷酸缓冲液Ⅱ淋洗，弃去流出液，用5mL磷酸缓冲液Ⅰ洗脱，收集洗脱液并用磷酸缓冲液Ⅰ定容至5mL，涡旋混匀，过0.45µm水相针式滤器后待测。

四、操作条件

1)色谱柱: ECOSIL C4 5μm 250mm×4.6mm 300Å  

2)检测波长: 280nm

3)柱温: 30℃

4)进样体积: 50μL

5)流速: 1.0mL/min

6)流动相: 0.1%三氟乙酸溶液和乙腈,梯度洗脱参数见表1。

五、柱容量验证图谱

图一 肝素亲和柱1谱图

图二 肝素亲和柱2谱图

六、柱容量验证数据

表2  柱容量验证数据

七、实验结论

本文按照国标方法验证了Lubex肝素亲和柱的柱容量，回收率均＞95%，满足国标对于柱容量的要求。